標本檢測影響因素分析如下:
一、標本的影響:溶血標本及混有紅細胞的血清采ELISA用法檢測易產(chǎn)生假陽性??赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺可溶性的有色物質(zhì),即顯藍色,產(chǎn)生假陽性[2]。所以嚴重溶血標本禁用。 標本受細菌污染。因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。 標本保存不當。在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成假陽性;為克服上述干擾,ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5 d內(nèi)測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測定,但混勻時應(yīng)輕柔,不可強烈振蕩。 塑料試管能吸附抗原物質(zhì),樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。使用真空采血管;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。 標本凝固不全。 在工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
二、 試劑影響 ELISA試劑盒檢測試劑廠家較多;不同廠家出產(chǎn)的試劑
靈敏度與特異性存在一定的差別,使用質(zhì)劣的試劑必然導致結(jié)果的假陽性或假陰性。因此,選擇高質(zhì)量的試劑是保證結(jié)果準確的關(guān)鍵之一。
三、操作技術(shù)的影響:吸量不準確,直接影響檢測結(jié)果。因此加樣器也要經(jīng)常清洗,定期校準。
溫育影響:抗原抗體結(jié)合及酶促反應(yīng)對溫度有嚴格要求,酶標板周圍與內(nèi)部孔升降溫速率不同,造成周邊與內(nèi)部孔結(jié)果差異;干浴與水浴存在明顯的差異,盡可能使用水浴,并要求固相板放入水中,減少受熱不均,貼密封膜,防止污物浸入。
加樣次序影響:有時我們在加樣過程中,常常會遇到個別標本未離心等情況,為了節(jié)約時間,往往這時我們會先加酶結(jié)合物,然后等標本分離好后再加標本,這樣,竟常常會造成HBeAb和HBcAb的假陰性。因為HBeAb和HBcAb都是競爭抑制法,先加入酶標記的抗體,首先與固相載體上的抗原結(jié)合,待加入顯色劑后,因酶的存在而顯色,故呈陰性[3]。