1.制備細胞懸液:對于懸液培養(yǎng)的細胞,可直接進行下面的步驟2(計數(shù)與計算過程)。如果計數(shù)對象為貼壁生長的細胞,首先需將培養(yǎng)物按如下步驟制備成細胞懸液。
①終止培養(yǎng),將培養(yǎng)液吸出,用PBS洗培養(yǎng)物一次。
②給培養(yǎng)瓶內(nèi)加入1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,于37℃消化3~5min 。期間不斷在鏡下觀察。當(dāng)細胞變圓接近脫壁時,棄消化液。
③加入一定量的培養(yǎng)液(如果這些培養(yǎng)細胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使細胞脫壁而制成細胞懸液。
2.計數(shù)與計算過程
①在細胞計數(shù)板中央放置計數(shù)的蓋玻片。
②用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計數(shù)板凹蹧處流出懸液,至蓋玻片被液體充滿為止。
③置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細胞總數(shù)。對于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者,對于細胞團按單個細胞計數(shù)。
④按下式計數(shù)細胞懸液的密度:細胞密度=(4個大格細胞總數(shù)/4)×104個/ml 。
二、注意事項:
①務(wù)必使分散成單個細胞,取樣計數(shù)前,充分混勻細胞懸液。
②顯微鏡下計數(shù)時,遇到2個以上細胞組成的細胞團,應(yīng)按單個細胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分。
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