ELISA試劑盒測(cè)定中試劑的準(zhǔn)備Z為關(guān)鍵,啦啦啦!
更新時(shí)間:2017-04-26 點(diǎn)擊次數(shù):1572
在實(shí)驗(yàn)室,對(duì)試劑準(zhǔn)備一般不太注意,通常的做法是,在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問題,ELISA試劑盒其直接的后果是對(duì)一些弱陽性標(biāo)本的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。因此在實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測(cè)定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度,以滿足測(cè)定要求。其次,上海恒遠(yuǎn)生化試劑有限公司還指出以下幾點(diǎn):
ELISA試劑盒的操作步驟
1、取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。
2、分組:取出96孔板,根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6個(gè)濃度)、空白孔、待測(cè)樣品組。
3、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:準(zhǔn)備小試管6 只,依次編好號(hào)碼,先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第三只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第五只試管中,充分混勻;然后在該試管中取100ul,棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。
注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。
4、加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水;其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
5、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
6、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒棄去,如此重復(fù)5 次,拍干。
7、加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外)。
8、溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。
9、洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標(biāo)板5次,用吸水紙*拍干。
10、顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。
11、終止:25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液。
12、讀板:在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值。
目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對(duì)所提供的濃縮液稀釋配制, ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存.
本公司提供的elisa試劑盒具有靈敏度高、質(zhì)量可靠、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。歡迎新老客戶。